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【助力冠狀病毒肺炎防控】TIANGEN冠狀病毒自動化提取檢測方案

發布日期:2020年02月12日   瀏覽次數617
2019年12月底,自湖北省武漢市開始多個省市陸續發生肺炎疫情。截至1月20日18時,境內累計報告新型肺炎病例224例,其中確診病例217例(武漢市198例,北京市5例,廣東省14例);疑似病例7例(四川省2例,云南省1例,上海市2例,廣西壯族自治區1例,山東省1例)。病毒傳染源尚不明確,疾病死亡率為3.2%。



2020年1月12日,世界衛生組織(WHO)發布公告,本次肺炎疫情由一種新型的冠狀病毒(2019-nCov)導致。冠狀病毒是一類在動物之間傳播的病毒,核酸類型為單鏈RNA。同時,WHO也發布了由中國學者分享的nCov的核酸序列信息,為病毒的檢出提供了分子檢測依據,讓快速地檢測和鑒定病原體成為可能。

WHO建議對發生咳嗽、發熱、呼吸道感染等急性呼吸系統疾病、且在14天內去過武漢或與其他患者暴露接觸者進行全面檢測,并于1月17日發布nCov的實驗室檢測的臨時指導(Laboratory testing for 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) insuspected human casesInterim guidance, 17 January 2020)。指導指出采集的材料包括呼吸材料(鼻咽和口拭子、痰液、肺泡灌洗液等)和血清樣本等,具體如下:

注*:要運輸用于病毒檢測的樣品,請使用包含抗真菌和抗生素補充劑的病毒運輸介質。對于細菌或真菌培養,運輸干燥或使用少量無菌水運輸。避免反復冷凍和解凍標本。運輸過程中注意人員保護,避免暴露。

 

對于病毒檢測,血清樣本可用免疫學方法檢測病毒,而更快速、更準確的檢測建議使用RT-qPCR的方式檢測nCov病毒核酸。由于病毒序列已知,只需選擇合適的試劑、配套確定的引物,即可快速檢測樣本中病毒核酸的含量。


(Diagnostic detection of Wuhan coronavirus 2019 by real-time RTPCR, Protocoland preliminary evaluation as of Jan 13, 2020)

天根生化科技(北京)有限公司作為中國核酸提取和檢測試劑上游供應的領軍企業,已經多次為國家病毒性流行病的診斷及預防提供支持工作,在手足口疫情、甲型H1N1流感疫情檢測中提供了超過1000萬人份的病毒檢測相關核心原料。2019年,天根生化又為生豬養殖和檢疫單位提供自動化核酸提取儀以及超過3000萬頭份病毒核酸提取檢測原料。

 

TIANGEN不但提供病毒的快速準確的提取和檢測試劑,還同時提供便捷高效的組織研磨和自動化核酸提取儀,組成了病毒的提取檢測的全套解決方案。


自動化核酸提取方案


TIANGEN全自動核酸提取儀是使用磁珠法進行核酸提取的自動化平臺,該平臺的應用不僅大大降低了檢驗檢疫部門的工作量,更減少了手工提取的操作失誤,確保了提取核酸質量的一致性和穩定性。


TIANGEN全自動核酸提取儀通量豐富(包括16、24、32、48、96通道),配套試劑可用于多種樣本類型的核酸提取,更能夠依據不同提取需求提供定制化試劑開發和儀器整合服務。


1.TGrinder H24 組織研磨均質儀




● 廣泛適用于各類組織及糞便樣本的研磨均質

● 研磨均質力度為傳統儀器2-5倍

● 研磨均質效果均一,避免交叉污染

● 自動保護裝置,保護實驗人員安全


2.TGuide S32 全自動核酸提取純化儀




● 樣本處理量:1-32個樣本

● 樣本處理體積:20-1000 μl

● 樣本類型:血液、細胞、組織、糞便、病毒等多種樣本

● 樣本處理時間:最快可8 min獲得病毒核酸

● 操控模式:Windows Pad 和機屏按鍵雙操控模式

● 平臺開發性:開放平臺,可自由搭配試劑


3.磁珠法病毒 DNA/RNA提取試劑盒(DP604)




● 適用廣泛:能夠從血清、血漿、拭子樣本、組織處理液、各種病毒保存液中分離純化高質量病毒DNA/RNA。


● 簡單高效:本產品與TGuide S32自動核酸提取儀完美契合,提取病毒DNA/RNA得率高、純度高、質量穩定可靠。


● 下游應用:純化后的核酸適用于病毒PCR及熒光定量PCR的下游實驗。


手動核酸提取方案


TIANGEN作為核酸提取及檢測領域的領軍者,擁有國內應用樣本類型最廣泛的核酸提取系列產品,能夠應對冠狀病毒檢測的各類樣本:血液、血清/血漿、組織、拭子、病毒等。


病毒基因組 DNA/RNA 提取試劑盒




● 高效率:快速純化得到高質量病毒 DNA 和 RNA,重復性高

 高純度:完全去除污染物和抑制劑,方便下游應用

● 高安全性:無有機試劑抽提或乙醇沉淀


RNA病毒檢測方案


1.Teasy自動化提取系統




● 精準度高:制冷模塊可以保持試劑樣本溫度在7℃以下超過60 min。每一個APM都按照國際標準進行校正,相比手工移液有著更高的精密度。
● 使用簡單:體積小,重量輕,模塊更換無需工具,內置的PCR/qPCR配制程序,簡化PCR配液人工操作
● 應用廣泛:可應用于96/384孔板分液/移液,PCR,qPCR,基因檢測等高通量實驗。

2.探針法一步反轉錄-熒光定量試劑盒(FP314)



TIANGEN研發的FastKing One Step RT-qPCR Kit (Probe)(FP314)特別為檢測樣本中的微量基因設計,是基于探針的一步法反轉錄熒光定量檢測試劑盒。試劑盒中的King RTase是分子改造后的新型逆轉錄酶,具有更強的RNA親和性和熱穩定性,大大提高了反轉錄效率和對復雜二級結構RNA模板的延伸能力;PCR過程中采用了新型熱啟動 Taq DNA聚合酶,使PCR反應具更高的擴增效率和特異性。此外,試劑盒對組分進行了最大限度的簡化,將taq和MLV酶混合為Enzyme mix,另將離子buffer、dNTPs、PCR穩定劑和增強劑預混為Master Mix,實驗中無需多組分混合,操作簡單便捷。

● 高效:性能優良的逆轉錄酶和DNA聚合酶保證了極高的反應效率;

● 抗逆:通讀GC含量高,二級結構復雜的RNA模板;

● 普適:對不同物種來源及雜質較多的RNA模板的適用性高;

● 靈敏:低至1 ng 的模板也能被準確識別,特別適合低豐度模板。


RNA病毒檢測實例


使用TGuide S32磁珠法病毒DNA/RNA提取試劑盒(DP604)提取禽流感H5病毒核酸,采用禽流感H5病毒檢測引物及探針,使用TIANGEN FastKing One StepRT-qPCR Kit (Probe)(FP314) 進行RT-qPCR 檢測, RT-qPCR 檢測儀器為ABi7500Fast。綜合上述200 μl禽流感H5病毒抗原(10-2、10-3、10-4、10-5、10-6和10-7稀釋倍數) 樣本病毒核酸提取實驗結果可以看出,病毒核酸提取結果得率良好,能夠滿足反轉錄、PCR、RT-PCR、熒光定量PCR 等后續實驗需求;定量檢測靈敏度高、重復性好、梯度稀釋線性度好,對于不同濃度的病毒核酸樣本都能精確定量檢測。


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